一、试剂盒组成、贮存、稳定性 说明书，耗材：DNA 制备管，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。 RNase A：50 mg/ml，室温保存。 Buffer S1：细菌悬浮液。加入RNase A 后，4°C 贮存。 Buffer S2： 细菌裂解液，室温密闭贮存。(若出现沉淀，应于37°C 温浴溶解并冷却至室温后再使用。） Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。 Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。 Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%乙醇。 Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。 二、注意事项 Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。 三、实验准备 1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1 中，4°C贮存。 2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。 3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。 四、操作步骤 第一次使用时，将试剂盒携带的RNase A全部加入到Buffer S1 中，混合均匀，4°C保存。 1. 取1-4 ml 在LB 培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g 离心1 min，弃尽上清。 2. 用250 μl 已加入RNase A 的Buffer S1 悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。 3. 加入250 μl Buffer S2，温和并充分地上下翻转混合4-6 次均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步骤不宜超过5 min。 4. 加入350 μl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6-8 次，12,000×g 离心10 min。 步骤5～7 可以选择负压法或离心法纯化质粒DNA。 A. 负压法 5A. 将质粒DNA 制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4 中的离心上清并转移到制备管中，开启并调节负压至-20-30 英寸*柱，缓慢吸走管中溶液。 6A. 加500 μl Buffer W1，吸尽管中溶液。 7A. 加700 μl Buffer W2，吸尽管中溶液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。 * 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 B. 离心法 5B. 吸取步骤4 中的离心上清并转移到DNA 制备管（置于2 ml 离心管中），12,000×g 离心1 min。 6B. 将制备管置回离心管，加500 μl Buffer W1，12,000×g 离心1 min，弃滤液。 7B. 将制备管置回离心管，加700 μl Buffer W2，12,000×g 离心1 min， 弃滤液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。弃滤液。 * 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 8. 将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。 9. 将制备管移入新的1.5 ml 离心管中，在DNA 制备膜正中央加60-80 μl 水或Eluent，室温静置1 min。12,000×g 离心1 min。 说明书，耗材：96孔DNA制备板，96孔1.6 ml深孔板，96孔V型底板。 Buffer PCR-A：DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀，应于65°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。 Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上指定的体积加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。 Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室温密闭贮存。 二、注意事项 1. 将洗脱液或水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。 2. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脱液中保存。 三、操作步骤 用户可以选择负压法或离心法。 A. 负压法 1A．正确连接负压装置，将96孔DNA制备板置于负压装置上；在PCR、酶切、酶标或测序反应液中，加3个体积的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混合均匀后转移到96孔DNA制备板中，开启并调节负压至-25-30英寸*柱，缓慢吸掉板中溶液。 2A．加0.3 ml Buffer W2，吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤两次。 * 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 3A．保持负压将96孔DNA制备板抽吸10 min。 4A．导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。 5A．将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室温静置1 min。≥3,000×g离心5 min洗脱DNA。 B. 离心法 1B．在PCR、酶切、酶标或测序反应液中，加3个体积的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混匀后，转移到96孔DNA制备板中，将96孔DNA制备板置于96孔1.6 ml深孔板中，1,000×g离心1 min，弃滤液。 2B．在96孔DNA制备板中，加0.3 ml Buffer W2，1,000×g离心1 min，弃滤液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤一次。 * 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 3B．将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中，≥3,000×g离心10 min。 4B．将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室温静置1 min。≥3,000×g离心5 min洗脱DNA。