1.首先，通过对比早期与晚期TNBC肿瘤微环境（TME）的单细胞图谱，发现早期TNBC具有更活跃的免疫表型，但常规标志物（如PD-L1和CD8）预测价值有限，提示需探索阶段特异性免疫特征。进一步通过高维单细胞数据聚类和基因签名分析，识别出一个与免疫治疗耐药相关的细胞亚群——干扰素刺激基因高表达的CD8+T细胞（ISG+CD8+T细胞）。该细胞群在非应答者中显著富集，且其基因特征在多个独立队列及蛋白水平均能有效预测抗PD1治疗反应，而在晚期TNBC或单纯化疗患者中无此预测价值。

2.深入的体外和体内功能实验表明，利用流式分选技术获取的ISG+CD8+T细胞表现出典型的衰老表型：端粒缩短、β-半乳糖苷酶活性升高、高表达KLRG1/CD57等衰老标志物及SASP因子，同时细胞毒性功能（如GZMB、IFN-γ、TNF-α分泌）显著受损。该类细胞在患者类器官及小鼠肿瘤模型中均杀伤能力减弱，且对抗PD1治疗不敏感。机制上，研究通过SCENIC转录因子调控网络分析和ChIP-qPCR实验证实，HLA-DR+单核细胞分泌的I型干扰素通过IRF9上调PARP8/9/10/14，导致NAD+耗竭、线粒体损伤和DNA损伤，诱导T细胞衰老。

3.干预研究中，发现NMN处理可恢复NAD+水平、逆转衰老表型并增强抗PD1效果。在动物模型中，NMN与抗PD1联用显著抑制了肿瘤生长，降低了肿瘤内ISG+CD8+T细胞比例，并提高了细胞毒性T细胞浸润，且该效应在CD8+T细胞缺失小鼠中消失。

4.最后，在一个包含87例患者的前瞻性队列中，利用患者来源类器官与自体T细胞共培养体系证实，NMN可显著增强抗PD1治疗的肿瘤杀伤效果，且该增效作用与基线ISG+CD8+T细胞富集程度呈正相关，表明其可作为预测NMN联合治疗受益的潜在生物标志物。

1.体内13C-葡萄糖示踪（代谢流分析）显示，Teff细胞将超过20%标记碳快速导入鞘糖脂(GSL)合成通路，而非仅用于能量代谢。

2.敲低或抑制生成UDP-葡萄糖(UDP-Glc)的关键酶UGP2，或阻断UDP-Glc转化为GSL的UGCG、GALE，均显著削弱Lm-OVA感染后Teff扩增与肿瘤控制，但不影响ATP产生。

3.UGCG缺失降低质膜脂筏密度，阻断TCR交联后脂筏聚集，削弱下游PLCγ1及c-Jun磷酸化，抑制GZMB、穿孔素等杀伤分子表达。

4.单细胞杀伤实验证实，UGCG缺失Teff需两倍数量才能达到与对照相同的肿瘤靶细胞裂解率；过继到B16-OVA荷瘤小鼠后，其延缓肿瘤生长和延长生存的效果完全丧失。

1.线粒体缺陷：Shank3b-/-和Fmr1-/y两种ASD模型小鼠的前扣带回（ACC）均出现线粒体体积缩小、呼吸链复合物活性紊乱、ROS升高及最大/储备呼吸能力下降；给予野生型WT神经元呼吸链抑制剂或H2O2可复制H2S升高，而外源健康线粒体可降低突变神经元H2S，证明线粒体功能障碍为H2S升高源头。

2.H2S升高：代谢组学显示两种模型ACC共有58种上调代谢物，其中硫氨基酸通路显著紊乱，半胱氨酸、同型半胱氨酸及H2S水平显著升高；CBS或3-MST表达改变支持H2S合成-清除失衡。

3.功能验证：在WT ACC中过表达CBS以升高H2S即可诱导树突简化、未成熟棘增多、E/I比下降、LTP受损及社交缺陷；反之，在两种ASD模型ACC中敲低CBS或杂合缺失CBS可降低H2S，恢复突触可塑性和社交行为。

4.机制研究： 高通量“硫巯化组”显示1986个硫巯化位点在Shank3b-/- ACC上调，其中mGluR5的C240/548/643位点硫巯化显著；构建三半胱氨酸突变mGluR5（C→S）可阻断硫巯化，恢复mGluR5-Homer1互作、LTP及社交功能。

5.干预策略： N-乙酰半胱氨酸（NAC）或限制含硫氨基酸（SAAR）饮食降低H2S水平与蛋白硫巯化，改善两种ASD小鼠及相应人源诱导神经元的社交表型；ASD儿童血液亦呈现半胱氨酸代谢物及H2S升高。

1.靶向代谢组检测：老年小鼠血清柠檬酸显著低于年轻小鼠，补充柠檬酸可显著提高其血清柠檬酸浓度。衰老细胞（RS）中柠檬酸浓度显著低于年轻细胞（PDL），补充柠檬酸可恢复衰老细胞中降低的柠檬酸盐水平。

2.动物实验：补充柠檬酸不仅缓解了老年小鼠身体功能障碍，还延长了其健康寿命。在喂食HFD的ApoE−/−小鼠中，柠檬酸缓解血管老化并改善内皮依赖性血管舒张。柠檬酸减轻动脉粥样硬化斑块形成并增强斑块稳定性。

3.细胞实验：补充柠檬酸延缓了人脐静脉内皮细胞衰老，例如衰老相关β-半乳糖苷酶和衰老标志物p21表达下降。柠檬酸激活了AMPK相关通路，逆转了衰老相关的线粒体功能障碍，并减少活性氧（ROS）的产生，且抑制AMPK 或升高ROS会抵消其作用。

1.与对照组相比，SDHB缺陷型MC38荷瘤小鼠表现出更好的肿瘤抑制和更高的肿瘤内PD-1+CD8+T细胞积累。补充琥珀酸会抑制B16-OVA荷瘤小鼠的肿瘤生长，且联合aPD-L1治疗会进一步增强效果。

2.代谢组学：琥珀酸处理使得CD8+T细胞能量代谢途径增强，包括葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、谷氨酰胺等含量增加。

3.NA测序：HIF-1α信号通路富集，且抗PD-L1治疗会诱导琥珀酸处理的CD8+T细胞表达更多的细胞毒性相关基因（如 GZMB、IFNG）。

4.CUT&Tag测序：琥珀酸处理的CD8+T细胞的干细胞样分化基因（Tcf7、Id3、Ccr7、Batf3）的启动子区域H3K4me3修饰增加、H3K27me3修饰减少，染色质可及性升高，而细胞效应功能基因（Klrc1、Ifng、Gzma）的H3K4me3修饰减少。

1.将表达mRFP的假狂犬病毒（PRV）注射到小鼠直肠肿瘤后，1周内外侧隔核（LS）、下丘脑外侧区（LH）以及骶髓脊髓中均检测到 mRFP+神经元。将编码eGFP的单纯疱疹病毒（HSV）注射到小鼠LS（外侧隔核） 后，48 小时内直肠肿瘤中eGFP+神经纤维与胆碱能标记tdTomato共定位。

2.通过HPLC （高效液相色谱）检测肿瘤中GABA浓度，发现激活LS GABA能神经元后，肿瘤内GABA浓度显著升高 ，乙酰胆碱（ACh）浓度降低。通过转录组分析发现，BMI（GABA受体拮抗剂）处理后Tspan1表达下调，脂质组证实肠道神经元释放GABA依赖囊泡途径。

3.对103例结直肠癌患者与健康人进行18F-FDG PET/CT检测，发现患者隔区18F-FDG 摄取（SUVR）显著升高，且隔区SUVR与肿瘤体积正相关。

1.对小鼠进行2个月的高果糖（Fru组）喂养后发现，Fru组在结肠、脾脏、肠系膜淋巴结和肝脏中Th1细胞频率显著升高，结肠中Tc1细胞及脾脏中Th17细胞频率也显著增加。通过构建小鼠模型进一步发现，高果糖摄入促进了Th17细胞的生成，加剧了结肠炎的严重程度。

2.非靶向代谢组学显示，果糖处理的T细胞中谷氨酰胺水平升高，进一步用谷氨酰胺酶抑制剂CB839处理或CRISPR/Cas9敲除谷氨酰胺酶基因（Gls），均能逆转果糖诱导的Th1和Th17细胞分化。

3.mTORC1抑制剂雷帕霉素处理显著抑制了果糖诱导的Th1细胞（IFN-γ+）和Th17细胞（RORγt+）的RNA及蛋白水平升高。

4.果糖和葡萄糖能够产生相同水平的ROS，且高浓度的果糖可诱导更多的Th17细胞分化。用抗TGF-β抗体或TGF-β受体抑制剂SB431542阻断TGF-β信号，可完全抑制果糖诱导的Th17细胞分化，ROS清除剂NAC也能逆转该效应。

5.通过体外实验进一步发现，二甲双胍可以缓解高果糖诱导的T细胞炎症及结肠炎。

1.首先通过流式细胞术与脂质组学分析，发现HF饮食组小鼠的肺中单核细胞、CD9+间质巨噬细胞和中性粒细胞数量增加，细胞内饱和长链脂肪酸积累，IL-1β表达上升，表明HF饮食可激活肺髓系细胞并改变其脂质组成。

2.接下来分析饱和脂肪酸激活炎症小体的机制，体外实验用硬脂酸（SA）和棕榈酸（PA）或油酸（OA）处理骨髓来源巨噬细胞（BMDMs），发现SA和PA可诱导NLRP3和Il1b基因表达及IL-1β分泌，并促进IRE1α依赖的Xbp1剪接；而OA无此效应。药理抑制IRE1α或胆碱磷酸胞苷酰转移酶α（CCTα）可阻断SA诱导的炎症小体活化和IL-1β释放，遗传缺失Ern1（编码IRE1α）或Pcyt1a（编码CCTα）也得到一致结果，证实SA通过CCTα–IRE1α轴促进炎症小体启动与活化。

3.随后验证膳食SA在体内的作用，饲喂小鼠高SA饮食（不含其他代谢干扰），发现即便无体重增加，仍可重现HF饮食的肺炎症表型，Scd1缺失小鼠（内源性SA积累）也显示类似炎症增强。相反，高OA饮食则减轻炎症细胞浸润与IL-1β释放，表明饱和与不饱和脂肪酸对肺炎症有相反调控作用。

4.为明确细胞与分子机制，利用基因敲除小鼠模型，发现SA诱导的肺中性粒细胞增多依赖于Ccr2介导的单核细胞招募及NLRP3/caspase-1炎症小体活化；髓系特异性缺失caspase-1或全身性缺失Nlrp3均能抑制该效应，中和IL-1β可显著减轻SA饮食小鼠的气道高反应性和炎症细胞浸润。

5.最后建立HDM+LPS诱导的中性粒细胞性气道炎症模型，发现SA饮食加重气道阻力、炎症细胞聚集及细胞因子产生，而OA饮食则起保护作用。药理抑制IRE1α内切酶活性可显著缓解SA饮食小鼠的肺部炎症与IL-1β产生。人类支气管肺泡灌洗液样本分析则证实小鼠研究结果的临床相关性。